糖酵解的关键酶：有3个，即己糖激酶、6-磷酸果糖激酶-1和丙酮酸激酶，它们催化的反应基本上都是不可逆的。调节方式有别构调节和共价修饰调节。

1.

6-磷酸果糖激酶-1

6-磷酸果糖激酶-1对调节糖酵解途径的流量最重要，通变构调节糖酵解的进行。

别构激活剂：AMP;ADP;F-1,6-2P;F-2,6-2P

别构抑制剂：柠檬酸;ATP（高浓度）

ATP对6-磷酸果糖激酶-1的调节:ATP与6-磷酸果糖激酶-1活性中心底物结合部位的ATP浓度低时，ATP对6-磷酸果糖激酶-1起变构激活的作用。

当活性中心外别构调节部位ATP高浓度时ATP起抑制作用。

2,6-双磷酸果糖对6-磷酸果糖激酶-1的调节：2,6-双磷酸果糖是6-磷酸果糖激酶-1最强的变构激活剂；其作用是与AMP一起取消ATP、柠檬酸对6-磷酸果糖激酶-1的变构抑制作用。

2.丙酮酸激酶

丙酮酸激酶是糖酵解的第二个重要的调节点，受到别构调节和共价修饰调节。

别构激活剂：1,6-二磷酸果糖

别构抑制剂：ATP,

丙氨酸

3.己糖激酶

己糖激酶受到反馈抑制调节，其中长链脂肪酰CoA和6-磷酸葡萄糖会抑制己糖激酶的活性，胰岛素则会激活己糖激酶的活性。