它们的基本原理是一样的：

不同的溶质，在固定相上吸附的牢固程度是不同的。

不同的溶剂，把同一种溶质从同一种固定相上洗脱的难易程度也是不同的。

溶质首先是吸附在固定相上，然后被溶剂 (流动相) 洗脱，洗脱后又被下游的固定相吸附，然后再次被洗脱。这样层析过程实际上是无数个吸附/洗脱过程的组合 (热力学上用塔板数 N 描述)，因此扩大了不同溶质的吸附/洗脱难易程度的差异，使之得到分离。

因为固定相会有不均匀性，溶质会因为浓度梯度而扩散，吸附/洗脱过程并不是瞬间达到平衡而是有传质阻抗，所以如果柱子短，流动相是良溶剂，加压，塔板数就少，洗脱峰就会很宽；

增加塔板数，洗脱峰就会变窄。

实验室用的固定相一般是硅胶或者三氧化二铝。在上柱层析前，通常用薄层色谱 (爬板子) 来确定合适的流动相。流动相洗脱能力太强容易分不开，就是所有点都爬得很高，甚至爬到顶上了；

太弱则都爬不起来，也分不开。

为了确定溶质在薄层色谱上的位置，点样的位置通常用铅笔圈出来；结束测试时流动相前锋的位置则用铅笔画一横线。

现在需要让板子上的溶质显色。如果溶质能被紫外线激发荧光，就可以用紫外灯照射薄层色谱 (板子) 或玻璃色谱柱来察看溶质的位置。

如果没有荧光，但溶质能吸附 I2，可以放在碘瓶里用碘蒸汽着色。如果能被氧化显色，可以用高锰酸钾。