原因一：过早打开灭菌锅当灭菌锅压力表示数为0而温度表示数还高与室温时，不要打开灭菌锅。因为打开锅盖瞬间，锅内大量热量散出，温度突然降低，试管内温度也随着降低，导致管内气减小，沸点降低，部分水会汽化留在小导管内。

解决办法：等灭菌锅内气压和温度都降到与室温一致或相差不大时再打开灭菌锅。**

原因二：试管塞塞得太紧（使用硅胶塞的时候）试管塞塞得太紧在灭菌时会导致试管内与灭菌锅内压力不一致。在灭菌锅升温升压时，锅内压力会大于管内压力；

灭菌锅降温降压时，锅内压力小于管内压力。锅内压力会大于管内压力时，试管内压力不够，不能将小导管内气体排尽，就留有气泡；

锅内压力小于管内压力时，可能会使试管塞和培养基崩出，培养基报废。解决办法：改用透气性好的棉花塞，切勿使用橡皮塞。

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原因三：小导管口太小我们可以把一根毛细管一端封口，另一端插进水里，毛细管里怎么都不会进水。同样把一个烧杯倒扣进水里就很容易进水了。

小导管在加压后一方面水要进去，另外里面的空气要出来，如果口太小的话，空气不容易出去，水也不容易进来，就会导致气泡六在里面了。

解决办法：改用内空较大的导管，尽量使用V型管，不要使用锥型管。

原因四：培养基质量引起由培养基质量引起的气体不能排尽或培养基含有高温高压分解产气的成分。灭菌时用水做培养基组的对照试验，若培养基组有气泡，而对照组没有气泡，可确定是有此原因引起。

解决办法：改用其它培养基。

原因五：灭菌锅工作压力不够，使气体不能排尽灭菌锅最大压力不够不能使管内液体强行把气体挤出，最后还留有小气泡，还会使温度上升缓慢，或达不到灭菌温度。

此原因的可能性较小，我们可以在排除原因一、二、三、四的情况下，用不加试管塞、大口导管做试验，若还仍不能达到效果，就要检查灭菌锅了。

解决办法：修理灭菌锅。

在灭菌开始前装培养基的时候，首先取出杜氏小管将培养基倒入试管中。

然后再用镊子夹住杜氏小管装入培养基。

第三步将试管倾斜（注意不要将其中的液体倒出），将装满培养基的杜氏小管口朝下放在试管的管口，慢慢竖立起试管，让杜氏小管滑到试管底部（杜氏小管直径很小装入的液体也有粘性，在虹吸作用以及液体粘性的情况下，杜氏小管内部不会进入气泡）。

最后再塞上试管塞。

注意：试管上的塞子一定要塞住，防止灭菌排气时将塞子顶出试管（现象之一就是灭菌结束打开灭菌锅时在试管口上全是乱七八糟的塞子）。